【图】实验肝组织中核酸的分离与鉴定 DNA技术的应用

细胞内的核酸多以核蛋白的形式存在，其中脱氧核糖核蛋白主要存在于细胞核 中，核糖核蛋白主要存在于细胞质中。这两类核蛋白在 0.14mol ／ L 氯化钠溶液中的溶解度相差很大，核糖核蛋白在此溶液中具有很高的溶解度，脱氧核糖核蛋白的溶解度却相当低。制成肝匀浆后，用 0 ． 14mol ／ L 氯化钠溶液抽提，可将两种核蛋白分离。分离过程中加入少量柠檬酸钠，可抑制脱氧核糖核酸酶对 DNA 的水解作用。 SDS( 十二烷基硫酸钠 ) 能使脱氧核糖核蛋白产生解聚作用，在含有脱氧核糖核蛋白的溶液中加入 SDS ， DNA 即与蛋白质分离开，用氯仿将蛋白质沉淀除去，而 DNA 溶解于水相，最后用冷乙醇将 DNA 析出，而获得纯化的 DNA 。在氯仿中加入少量异戊醇能减少操作过程泡沫的产生，并有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白，下层有机溶剂相维持稳定。 DNA 和 RNA 在波长 260nm 处有很高的吸收峰值，蛋白质则在 280nm 处有很高的吸收峰值。利用这个原理，测定纯化样品在 260nm 和 280nm 处的吸光度，可以推算出样品中 DNA 的浓度，并判断其纯度。在标准条件下，当 A260 ＝ 1 时，样品中双链 DNA 浓度为 50 μg/ml ，单链 DNA 浓度为 40 μg/ml 。纯净的 DNA 样品 A260/A280 的比值约为 1.8 ，样品中含有蛋白质或其它杂质，会使 A260/A280 的比值下降。掌握 DNA 分离纯化的原理和方法。熟悉台式离心机 的使用。掌握 DNA 定量技术。

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