【图】实验肝组织中核酸的分离与鉴定 DNA技术的应用

在制备肝匀浆时 , 在进行。在冰浴中进行，全部操做过程注意抑制 RNase 活性。各步骤操作应力求准确，尽量减少中途核酸的丢失，保证定量测定的准确性。稀释后应该尽量使样品 A260 和 A280 处于 0.1-0.7 的范围内。操作步骤:1 ．肝匀浆制备：新鲜猪肝，用 0.9 ％ NaCI 洗去血液，除去结缔组织，剪碎，称取 4g 肝组织，加 4ml 0.14mol ／ L NaCl 溶液，匀浆器中研磨，制成肝匀浆。2 ．分离核蛋白：肝匀浆倒入试管中， 4000r/min 离心 5min ，上清弃去。沉淀加 2 m 1 0.14 mol/L NaCl 搅匀后再置匀浆器中研磨， 4000r/min 离心 5min ，上清弃去，沉淀重复上述操作，上清弃去，沉淀为 DNA- 蛋白质复合物。3 ．沉淀中加 0.14mol/L NaCl 2.0ml ，搅匀，滴加 5 ％ SDS 2.0m1 ，边加边搅， 60 ℃ 水浴 10 min( 不停搅拌 ) ，冷至室温，均匀分成两管为 Bl 、 B2 。4 ． B1 、 B2 管中各滴加氯仿 - 异戊醇液 4.0m 1( 边加边搅 ) ，搅至溶液颜色均匀， 3000r/min 离心 15min 。溶液分三层，上层液为水相 ( 含 DNA) ，中层为蛋白质沉淀，下层为有机相，吸取 B1 、 B2 上层液合倒于另一试管中。5 ．上清液加 95 ％冷乙醇 4.0m 1 ，混匀 ( 颠倒混匀法 ) ， 3000r/min 离心 15min ，去上清液，沉淀为纯化 DNA 。6 ． DNA 的溶解：沉淀中加入 0.1 mol/L NaOH 4.0ml ，搅拌溶解， 2000r/min 离心 10min ，上清液则为 DNA 水解液。7 ． DNA 的测定：用 0.1mol/L NaOH 将样品稀释到一定浓度，以 0.1mol/L NaOH 调零，测定样品的 A260 和 A280 ，计算出每克肝组织中的 DNA 含量，并判断纯化 DNA 的纯度。

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