【图】实验肝组织中核酸的分离与鉴定 DNA技术的应用

掌握 RNA 分离纯化的原理及操作方法,掌握 RNA 定量技术。注意事项:1 ．在制备肝匀浆时，应尽量在冰冷条件下进行，并尽快加入含 0.0l mol ／ L 柠檬酸钠的 0.14mol/L 氯化钠溶液，以抑制脱氧核糖核酸酶 ，防止 DNA 的分解，以提高核酸得量。2 ．各步骤操作应力求准确，尽量减少中途核酸的丢失，保证定量测定的准确性。3 ．稀释后应该尽量使样品 A260 和 A280 处于 0.1-0.7 的范围内。根据前面所述， DNA 和 RNA 这两类核蛋白在 0.14mol ／ L 氯化钠溶液中的溶解度不同，制成肝匀浆后，用 0.14mol ／ L 氯化钠溶液抽提，可将两种核蛋白分离 。在含有核糖核蛋白的 0.14mol ／ L 氯化钠溶液中，调节 pH 至 4.2 ，使其达到等点电，核糖核蛋白即从溶液中沉淀出；用热的 10 ％氯化钠溶液抽提核糖核酸，最后用冷乙醇将核糖核酸钠析出，而获得纯化的 RNA 。分离过程中注意 RNase 的活性，防止 RNA 的降解。 RNase 无处不在，且耐高温， RNA 的提取条件比 DNA 要严格得多，常采用 DEPC( 焦碳酸二乙酯 ) 来抑制 RNase 的活性。样品中 RNA 的浓度及纯度测定，与前相同，在此不再赘述，纯度较高的 RNA 样品，A260/A280=1.8 ～ 2.0 ，如果 A260/A280 ＜ 1.8, 说明样品中含有蛋白质等，可用苯酚 - 氯仿抽提除去。

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